在ADC（抗体药物偶联物）和GPCR（G蛋白偶联受体）相关药物研究中，内化研究都具有极其关键的重要性，尽管其具体的作用机制和关注点有所不同。内化过程直接影响药物的疗效、特异性、安全性以及耐药性。

pHSense™ Eu探针是瑞孚迪推出的新一代镧系铕穴状化合物，专为内化研究而开发。

技术原理：pH驱动的“信号开关”

✔ 胞外状态（中性pH）：pHSense™ Eu探针位于细胞外，荧光信号极低（静默）。

✔ 内化后（酸性内体/溶酶体）：探针随ADC/GPCR进入酸性环境，触发强烈、长寿命的Eu荧光信号。

凭借独特的二维pH灵敏度特性，pHSense™ Eu探针可实现高灵敏、高检测窗口的ADC/GPCR内化检测。

pHSense™ Eu探针可通过不同形式标记ADC/GPCR，应用广泛：

ADC内化实验步骤：整个实验流程仅需四步，且只需在细胞培养板操作即可。

以贴壁细胞为示例，步骤为：细胞过夜培养-弃培养基上清-加入经pHSense™ Eu Fab anti-Human lgG标记的ADC-读数，全程无需洗涤，支持实时监测。同时，基于酶标仪读取数值的检测形式，大大提高了实验的效率和通量，且支持96&384-wells通量。

实例验证：下图左图使用2nM的pHSense™ Eu Fab anti-Human lgG试剂标记后的Trastuzumab抗体，加入过表达HER2的BT-474细胞中，37°C孵育，使用酶标仪动态检测620nm发射光，随着时间可清晰观察到特异性抗体内化信号，而Irrelevant IgG1和Fab探针单独对照组随着时间推移信号保持不变，且始终表现出极低的背景信号。

右图使用pHSense™ Eu Fab anti-Human lgG试剂标记不同浓度的Enfortumab-vedontin ADC，加入表达了Nectin-4的SUM190-PT细胞中，37°C孵育5小时后用酶标仪检测620nm发射光，检测出的EC50值与已发表文献一致。

GPCR内化实验步骤：以Anti-Flag为例（适用于带有Flag标签的GPCR）：

（1）细胞铺板过夜→弃上清

（2）加入pHSense™ Eu探针→孵育

（3）加入化合物（激动剂/拮抗剂）

（4）酶标仪读数（可实时监测）

实例验证：下图结果清晰显示Exendin-4浓度依赖的内化响应，信号强度随激动剂浓度升高而显著增加。

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