蛋白质样品质量的好坏直接影响到下游实验应用（WB、IP等），不同的实验对蛋白质样品的要求也不尽相同（天然蛋白/变性蛋白）。说到蛋白提取技术，可能大家并不陌生，它贯穿于蛋白检测实验的方方面面，是决定实验成败的基础因素。分离纯化蛋白质，首先要从原材料中提取目的蛋白，然后通过粗分离的方法除去大量杂质，最后进行精细分离，得到目的蛋白。

蛋白制备（提取）知多少

蛋白质的制备（提取）是指将经过处理或破碎的细胞，放在一定的条件和溶液中，让被提取物充分释放出来的过程。

蛋白提取方法有三种：

a.溶液法：如RIPA 裂解液

b.萃取法:如有机溶剂萃取TCA沉淀

c.柱式法:离心管柱分离

蛋白质样品制备时，大多实验室采用化学裂解法破坏细胞膜以释放细胞内的可溶性物质，化学裂解法主要采用裂解液处理，实验室常用的RIPA裂解液就属于化学裂解法。

RIPA裂解液作为样品总蛋白提取剂，已经有很多年的历史了，称它为最经典也是最常见的细胞组织快速裂解液也不为过。其原理是利用表面活性剂来裂解细胞膜，再从动物组织和细胞中抽取出可溶性蛋白。

RIPA裂解液并不能获得真正的总蛋白！

RIPA法提取蛋白方便、快捷，大致步骤基本可以概括为：称取样品，加入适量裂解液，研磨至充分裂解，离心取上清即可进行后续的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。

可是经典常用的东西，并不一定意味着完全是对的。越来越多的科学家发现，RIPA法提取出的蛋白并不是十分准确，其缓冲液可能造成蛋白质的随机损失。大家在进项相关实验时，是不是会遇到些结果数据整理起来根本解释不通的情况，不断优化实验，小心翼翼操作，结果却也很难让人接受。这就有可能是在蛋白提取时出现了纰漏。

RIPA裂解液的工作原理是利用去污剂等裂解细胞膜（包括核膜），从组织或细胞中抽取可溶性蛋白，RIPA裂解液的配制方法有很多种，其有效裂解成分主要是去污剂。去污剂（也称为表面活性剂）是细胞裂解液中必不可少的一种成分，起到了破坏脂质双分子层、破裂细胞以及溶解蛋白等作用。

针对不同的实验研究，市面上的RIPA裂解液根据去污剂种类及组分的不同分为强、中、弱等几类，但RIPA裂解液并不一定能满足你的实验需求。

RIPA 裂解组织或细胞会产生可溶性组分和不可溶性组分，并且在不可溶组分中仍存在蛋白。

不可溶组分中可能含有细胞骨架、细胞外基质的蛋白成分以及部分膜蛋白、核蛋白等，这部分蛋白的缺失可能会导致后续实验产生不可信、不稳定结果。

RIPA法提取蛋白有很多的未知因素，也有很多人尝试优化RIPA的配方，通过改变各组分间的比例，以达到为提取特定小分子蛋白或其他蛋白的目的。结果都有所成效，但也需要大量时间与精力来验证，在我们的一般实验中并不实用。

针对蛋白丢失问题以及RIPA法提取蛋白有很多的未知因素，INVENT推出了柱式法蛋白提取技术，可有效的裂解组织/细胞，相比于RIPA裂解液可以得到更加完整的蛋白谱，避免蛋白的丢失，从而减少了蛋白质样品制备对下游实验的影响。

离心管柱式提取蛋白“多，快，好，省”

一.什么是柱式法蛋白提取？

柱式法是美国Invent公司推出的利用离心管柱技术进行蛋白质提取的技术。就像DNA，RNA，质粒提取一样，蛋白提取也可以用柱式法提取了！

二. 柱式法都可以提取什么蛋白？

柱式法可以提取动物，植物等样品的不同类型蛋白质，包括总蛋白，膜蛋白，细胞器蛋白，胞浆蛋白，胞核蛋白等等，可以把细胞内的蛋白谱完整地提取出来，不再像RIPA一样只能提取RIPA可溶性蛋白，产生总蛋白丢失的问题。柱式法还非常擅长特殊样品的处理，例如血管，皮肤，骨骼，小肠，脑组织，角质组织；另外还有一些厚壁微生物样本的蛋白制备，如细菌，真菌，酵母，微藻等等！

三. 柱式法提取的蛋白能做什么实验？

柱式法提取试剂盒含有特制优化的裂解液系统，针对不同的下游实验配备了针对性的裂解液，提取的蛋白质可以用于 SDS-PAGE, immunoblottings, IP, ELISA，Co-IP，质谱，2-D，酶活性检测及其他应用。

四、RIPA法和柱式法的区别

五、Invent柱式蛋白提取的优势

1. 操作简单、快速，1-8 min 之内即可完成：裂解和提取的效率高；

2. 优化裂解液配方，无蛋白丢失，蛋白得率高：比RIPA的溶解性高，对脂溶性和水溶性蛋白都可以提取出来；

3. 离心柱技术：有效去除核酸以避免核酸对下游实验的干扰；

4. 无需超声破碎、煮沸、反复冻融：裂解条件温和，不用超声、煮沸、冻融等苛刻的条件；

5. 可选择提取天然或者变性蛋白质：提供了两种不同的裂解液，分别可以提取变性和非变性蛋白，兼容更多的下游实验。

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