公司动态
知识课堂
联系我们

北京成志科为生物科技有限公司

地址:北京市石景山区鲁谷路136号院紫御长安1号楼8808 

联系电话

010-88182880

电子邮箱

info@czkwbio.com


新型柱式蛋白提取试剂盒!

蛋白质样品质量的好坏直接影响到下游实验应用(WB、IP等),不同的实验对蛋白质样品的要求也不尽相同(天然蛋白/变性蛋白)。说到蛋白提取技术,可能大家并不陌生,它贯穿于蛋白检测实验的方方面面,是决定实验成败的基础因素。分离纯化蛋白质,首先要从原材料中提取目的蛋白,然后通过粗分离的方法除去大量杂质,最后进行精细分离,得到目的蛋白。

蛋白制备(提取)知多少

蛋白质的制备(提取)是指将经过处理或破碎的细胞,放在一定的条件和溶液中,让被提取物充分释放出来的过程。

蛋白提取方法有三种:

a.溶液法:如RIPA 裂解液

b.萃取法:如有机溶剂萃取TCA沉淀

c.柱式法:离心管柱分离

蛋白质样品制备时,大多实验室采用化学裂解法破坏细胞膜以释放细胞内的可溶性物质,化学裂解法主要采用裂解液处理,实验室常用的RIPA裂解液就属于化学裂解法。

RIPA裂解液并不能获得真正的总蛋白

RIPA裂解液作为样品总蛋白提取剂,已经有很多年的历史了,称它为最经典也是最常见的细胞组织快速裂解液也不为过。其原理是利用表面活性剂来裂解细胞膜,再从动物组织和细胞中抽取出可溶性蛋白。

RIPA裂解液并不能获得真正的总蛋白!

RIPA法提取蛋白方便、快捷,大致步骤基本可以概括为:称取样品,加入适量裂解液,研磨至充分裂解,离心取上清即可进行后续的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。

可是经典常用的东西,并不一定意味着完全是对的。越来越多的科学家发现,RIPA法提取出的蛋白并不是十分准确,其缓冲液可能造成蛋白质的随机损失。大家在进项相关实验时,是不是会遇到些结果数据整理起来根本解释不通的情况,不断优化实验,小心翼翼操作,结果却也很难让人接受。这就有可能是在蛋白提取时出现了纰漏。

RIPA裂解液的工作原理是利用去污剂等裂解细胞膜(包括核膜),从组织或细胞中抽取可溶性蛋白,RIPA裂解液的配制方法有很多种,其有效裂解成分主要是去污剂。去污剂(也称为表面活性剂)是细胞裂解液中必不可少的一种成分,起到了破坏脂质双分子层、破裂细胞以及溶解蛋白等作用。


针对不同的实验研究,市面上的RIPA裂解液根据去污剂种类及组分的不同分为强、中、弱等几类,但RIPA裂解液并不一定能满足你的实验需求。

RIPA 裂解组织或细胞会产生可溶性组分和不可溶性组分,并且在不可溶组分中仍存在蛋白。


不可溶组分中可能含有细胞骨架、细胞外基质的蛋白成分以及部分膜蛋白、核蛋白等,这部分蛋白的缺失可能会导致后续实验产生不可信、不稳定结果。

RIPA法提取蛋白有很多的未知因素,也有很多人尝试优化RIPA的配方,通过改变各组分间的比例,以达到为提取特定小分子蛋白或其他蛋白的目的。结果都有所成效,但也需要大量时间与精力来验证,在我们的一般实验中并不实用。

针对蛋白丢失问题以及RIPA法提取蛋白有很多的未知因素,INVENT推出了柱式法蛋白提取技术,可有效的裂解组织/细胞,相比于RIPA裂解液可以得到更加完整的蛋白谱,避免蛋白的丢失,从而减少了蛋白质样品制备对下游实验的影响。


离心管柱式提取蛋白“多,快,好,省”


一.什么是柱式法蛋白提取?

柱式法是美国Invent公司推出的利用离心管柱技术进行蛋白质提取的技术。就像DNA,RNA,质粒提取一样,蛋白提取也可以用柱式法提取了!

二. 柱式法都可以提取什么蛋白?

柱式法可以提取动物植物等样品的不同类型蛋白质,包括总蛋白,膜蛋白,细胞器蛋白,胞浆蛋白,胞核蛋白等等,可以把细胞内的蛋白谱完整地提取出来,不再像RIPA一样只能提取RIPA可溶性蛋白,产生总蛋白丢失的问题。柱式法还非常擅长特殊样品的处理,例如血管,皮肤,骨骼,小肠,脑组织,角质组织;另外还有一些厚壁微生物样本的蛋白制备,如细菌,真菌,酵母,微藻等等!


三. 柱式法提取的蛋白能做什么实验?

柱式法提取试剂盒含有特制优化的裂解液系统,针对不同的下游实验配备了针对性的裂解液,提取的蛋白质可以用于 SDS-PAGE, immunoblottings, IP, ELISA,Co-IP,质谱,2-D,酶活性检测及其他应用。

四、RIPA法和柱式法的区别


五、Invent柱式蛋白提取的优势

1. 操作简单、快速,1-8 min 之内即可完成:裂解和提取的效率高;

2. 优化裂解液配方,无蛋白丢失,蛋白得率高:比RIPA的溶解性高,对脂溶性和水溶性蛋白都可以提取出来;

3. 离心柱技术:有效去除核酸以避免核酸对下游实验的干扰

4. 无需超声破碎、煮沸、反复冻融:裂解条件温和,不用超声、煮沸、冻融等苛刻的条件;

5. 可选择提取天然或者变性蛋白质:提供了两种不同的裂解液,分别可以提取变性和非变性蛋白,兼容更多的下游实验


产品推荐

如何购买

北京成志科为生物是Invent公司授权一级代理商,咨询或订购欢迎联系我们(010-88182880),或者直接联系区域业务员。所有产品均有现货。更多详情请登录厂家网站:https://www.inventchina.cn/



上一篇:成志科为自产ELISA试剂盒热销产品促销    下一篇:PerkinElmer品牌北京区一级代理
版权所有:北京成志科为生物科技有限公司    京ICP备17067771号-1     技术支持:华大网络